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绿叶公司规模猪场VIP活动专区 135高效保健养猪技术

我国主要猪传染病防治研究进展

2007-04-25 10:43:44来源:转载作者:浏览:次 分享:

猪伪狂犬病 研制成功区分强弱毒感染的鉴别诊断方法:gG-EKISA(酶联免疫吸附试验)和gE-ELISA,gG-LAT(乳胶凝集试验)和gE-LAT。拟订出了我国猪伪狂犬病的根除计划,根据不同猪场、不同情况和实验室检测情况,选择不同的方案与措施。

猪繁殖与呼吸综合症:应用原核表达系统,以融合蛋白的形式高效表达了PRRSV的核衣壳蛋白(N蛋白),其含量达到了菌体蛋白含量的32%,该表达产物能与抗N蛋白的单克隆抗体发生特异性反应。活性检测试验表明,该蛋白不仅能与PRRSV的多克隆抗血清发生反应,而且反应敏感,非特异性背景较低,与以全病毒为包被抗原进行的ELISA检测结果相吻合。这为今后以此表达产物为抗原,建立反应敏感、特异、准确的PBRSV的检测方法,从而替代用制备过程比较复杂的全病毒为抗原进行ELISA检测奠定了基础。研究表明,PRBSVORF5编码的GP5(E)蛋白能在猪体内诱导产生中和抗体,且起主要作用的表位是构象型中和表位,与GP5蛋白的二级结构密切相关。PRRSV中国分离株B13株的ORF基因被正确插入到杆状病毒的基因组DNA中,构建出了重组病毒AcMNPV-OCC-ORF5,用该重组病毒感染Sf9细胞,获得了能够被猪抗PRRSV B13株血清特异识别的表达产物。ORF5基因表达产物与天然蛋白分子量十分接近,说明杆状病毒表达系统能较适当地进行合成蛋白的加工和修饰,为PRRS基因工程疫苗的研究奠定了基础。建立了诊断猪繁殖与呼吸综合症与日本乙型脑炎的二联PCR方法。建立了微量免疫滴定技术测定PRRSV TCID50的新方法――免疫染色法。应用蚀斑克隆技术对一株美洲株疫苗弱毒株进行了筛选,选育出高增殖力的、安全高价的弱毒株。

猪圆环病毒感染:分离鉴定了国内PCV毒株。通过DNA序列分析证实,圆环病毒(PCV)中国分离株与国外分离株同源性不是特别高,推测病毒已发生变异。建立并初步应用了检测PCV的复合PCR方法。

猪细小病毒病:国内已经开始了猪细小病毒病基因工程亚单位疫苗以及核酸疫苗的研究。试验表明,以PPV结构基因VPI和VP2分别构建的核酸疫苗,均能诱导产生较高水平的体液免疫和细胞免疫。核酸疫苗的生产简便,成本低廉,有着理想的应用前景。对PPV SY-99株非结构蛋白NS1基因进行了克隆与原核表达,其意义在于检测NSI的抗体可以用来区别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪。

猪乙型脑炎:应用pET-30b(+)表达载体表达的NS1蛋白具有较好的免疫学活性,可作为一种候选亚单位疫苗。

猪链球菌病:荚膜2型猪链球菌已成为一种重要的新病原菌,致病差异与各菌株的毒力因子是直接相关的。已知的毒力因子有溶菌酶释放因子(MRP)、细胞外蛋白因子(EF)、溶血素、荚膜多糖以及44K蛋白、IgG结合蛋白、纤毛、粘着素等。其中溶菌酶释放蛋白(MRP)与细胞外蛋白因子(EF)是猪链球菌2型的两种最重要的毒力因子。基因序列同源性分析结果显示:我国猪链球菌2型江苏分离株SS2-1毒力因子MRP与EF基因序列与国外分离株的两毒力因子的序列高度一致。这一结果表明猪链球菌2型菌株的毒力因子MRP与EF的基因序列极为保守,从而为2型链球菌毒力因子MRP与EF的基因检测与鉴定以及猪链球菌2型菌的免疫研究提供了依据。建立了PCB检测方法,有利于疾病发生时的快速诊断和流行病学的调查。建立了检测MRP的PCR方法,全程只需7小时左右,且最低只需100个细菌即能检出,敏感性和特异性很高。在对临床分离的致病性猪链球菌进行分群鉴定的基础上,通过随机扩增多态性DNA(PAPD)技术对其分型,确定了不同菌株间的遗传距离,挑选出有代表性的菌株制成多价灭活疫苗,用于猪链球菌病的免疫防治。建立了链球菌特异性间接血凝(I-HA)试验方法,为链球菌的分群鉴定、血清学调查、多价疫苗菌种的选择以及疫苗应用效果的监测提供了新的检测手段。链球菌病多价灭活疫苗首次在国内明确采用C、D两强毒菌株作为制苗材料,由于C、D群是国内脑炎型和败血型链球菌病的主要病原,所以这种疫苗具有广泛的适用性,克服了各地现行的弱毒或灭活的单价苗抗原的片面性和局限性。系统、全面地提出了本病诊断、致病菌的分离和分群鉴定以及疫苗的免疫程序、药物防治、消毒及管理诸方面一整套综合措施。

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猪接触传染性胸膜肺炎:对胸膜肺炎放线杆菌(APP)主要致病因子的致病性及其免疫原性的研究结果表明,这些毒力因子包括荚膜多糖(CP)、脂多糖(LPS)、外膜蛋白(OMP)、细胞毒素(Apx)、转铁结合蛋白(TBP)、蛋白酶、渗透因子、菌毛等,并且认为任何一种毒力因子均不能提供完全有效的免疫保护。其中Apx是本菌最重要的毒力因子。现已证明不同血清型的菌株可产生3种Apx,它们具有溶细胞作用,属于含重复子毒素(repeats-intoxin,RTX)家族。APP有很多血清型,其划分依据是基于细菌CP及LPS对血清的反应。迄今为止已鉴定出两个生物型和12个血清型,其中血清5型又分为A、B两个亚型。建立了用于APP定性的ELISA抗体检测方法,已编入国家标准。华中农大建立了检测猪胸膜肺炎放线杆菌的PCR方法。

猪气喘病(猪支原体肺炎,MPS):在国内首次提出了“规模化种猪场猪气喘病的防治与净化措施”方案。该病的发病特点为:(1)品种敏感性强。(2)猪场隐性感染和潜伏性感染猪为主要危害,尤以初产母猪为甚。(3)高感染率种猪场仍以药物防治为主,配合免疫和生物安全措施,需根据猪场用药历史、种猪结构确定适当的药物,适当的用药程序比药物本身更重要。(4)MPS常与多种细菌、病毒及环境因素协同作用,引起猪呼吸道综合症(PRDC),多因子包括猪瘟(HC)、猪流感(SI)、伪狂犬病(PR)、猪繁殖与呼吸道综合症(PRRS)、克雷伯氏杆菌、副嗜血杆菌(HPS)、猪圆环病毒(PCV)感染与断奶后多系统衰弱综合症(PMWS)、猪胸膜肺炎放线杆菌感染(APP)、猪多杀性巴氏杆菌感染(Pmt),萎缩性鼻炎(AR)、猪霍乱沙门氏菌病等。PRDC临床表现为嗜眠、厌食、发烧、咳嗽。在18周龄-20周龄发展到严重程度,临床表现明显,俗称“呼吸道病18周龄墙”,PCV引起的PMWS和间质性坏死性肺炎(PNDS)是另一个重要的协同因子。在规模化猪场,PRDC特别是其中的PRRS、PCV感染和链球菌感染为呼吸道病防治提出了新课题。目前常用于治疗该病的药物有盐酸土霉素、泰乐菌素、泰妙菌素、林可霉素、克林霉素、喹诺酮类药物。种猪场为防范MPS发生,一般采取饲料或饮水中全群投药,药物投放的时间、种类、剂量、疗程应根据猪群状况确定不同的投药策略。MPS免疫机理决定了MPS产生免疫的能力相对较弱,以产生体液免疫为主的灭活疫苗免疫能力更弱。
MPS的免疫要点为:(1)总体上,弱毒苗、灭活苗免疫力有限,免疫时控制同圈感染至关重要。(2)多胎母猪或种公猪可以通过药物使其成为具有抗感染能力的康复猪,或用灭活苗提高其免疫力,以降低带菌率,生物安全体系与饲养管理要相结合。地方品种猪阳性场或MPS较高感染率猪场净化方案:须首先对母猪、仔猪进行程序性用药,仔猪5日龄-7日龄用疫苗免疫,可逐步建成一个免疫场。针对猪场生产状态,在不影响生产的情况下,采取严格淘汰病猪、药物治疗及疫苗预防、强化饲养管理为主的综合防治措施,使猪气喘病发病率降低至5%以下,即基本达到控制标准。国外引进猪原种猪场或MPS低感染率自繁自养猪场净化方案:由国外引进的纯种杜、长、大及PIC、达兰、斯格、迪卡配套系,由于核心场多采用SPF技术,MFS一般很少存在,严格隔离饲养和21天断奶可有效防止MPS的发生,但引进猪场与有MPS的其它猪混群,则须进行疫苗防疫,并适当配合用药,加强饲养管理和提高生物安全标准,同时对APP、AR、PR、链球菌病等综合控制。有条件的可采用剖腹产建立无特定病原(SPF)猪核心群,积极推广加药早期断奶和早期隔离断奶技术。另外采用保健养猪的方法提高饲料蛋白的利用率,改善饲舍环境,提高动物自身免疫力,也是减少或避免此病的另一重要方法。

猪附红细胞体病:目前的诊断主要还只是在血片中查找虫体,CFT只适于群体检查,不适于个体检查,且敏感性低。EUSA的敏感性明显高于CFT,且能证明E.suis抗原与猪的其它疾病的血清无交叉反应,是一种敏感、快速、特异的诊断方法,但此法不适用于E.suis的诊断。虫血症期间,感染猪血液中含有大量E.suis,故可以从血液中抽提DNA,以32P标记制成探针,能区别感染猪和非感染猪,并且不与其它疾病血清中的DNA发生杂交反应。后来又用PCR技术检查猪附红体感染,证明感染后24小时即可出现PCR阳性。PCR-DNA杂交技术经常规检测方法更简便准确、敏感特异、快速,易于操作,有助于常规分析,但抗体水平具有一定的波动性,阳性结果仅仅在个体检测中有意义。故应进一步改进以适用于群体检测。药物治疗方面,目前用于治疗该病的药物虽有多种,但缺乏特效药物。值得注意的是,大量实验证明suis为条件致病性病原体,其感染和发病主要与机体免疫状况有关。当机体免疫系统发育不健全(或免疫系统受到抑制)或抵抗力下降或处于某些应激状态时,附红体感染率和发病率上升。

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