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1.口蹄疫血清学效力检测替代方法
通过检测疫苗免疫后的抗体滴度水平来评价疫苗免疫效力，检测方法主要包括病毒中和试验和各种ELISA试验。1968年，Stellman等¨驯提出了用中和抗体滴度分析疫苗效力的统计学方法;到1976年，Pay等¨引根据中和抗体滴度和疫苗效力的关系建立了疫苗的抗原剂量、中和抗体滴度和保护率的相关公式。世界各国的研究工作者都尝试用血清学方法评价疫苗的效力，以替代本动物的效力检验方法，取得了一定的进展。上世纪80年代，Black等Ⅲ1提出抗体平均值预测方法，试验建议用平均中和抗体滴度1.7410910作为疫苗合格的判断标准。2003年，Bar-nett等旧川采用bootstrap的方法进行疫苗效力测定，试验首先通过统计分析获得回归方程，将免疫21d测定的中和抗体结果代入公式预算某个稀释度的疫苗保护率。2007年，Coils等怕1采用回归方程结合ROC(Receive Operating Characteristic)曲线确定了抗体滴度最佳临界点和可疑值范围，用最佳临界点来预测某个动物是否保护，然后再计算PD卯。血清学试验不需要在动物舍内进行有毒性的操作，减少了病毒向外界散播的危险;不需要对动物进行攻毒，消除了攻毒试验给动物带来的损害；还省去了攻毒后的观察期，缩短了试验周期。抗体滴度测定使试验从定性(死亡或出现临床症状)走向了定量，排除了人为判定误差或试验动物健康状况影响试验结果;与攻毒程序相比，血清学试验可以对试验样品进行保存，当产品上市出现问题或管理机构要对疫苗进行复检时可应用保存的样品进行重复试验。有的动物有很高的抗体梯度，但攻毒后仍然发病;有的动物几乎检测不到抗体，但却受到了保护，这些现象表明仅靠抗体水平衡量动物是否被保护是欠妥的。由于不同试验室所用的检测方法、试剂以及判断标准等方面难以统一，以至这类研究结果应用于实际生产中存在困难。另外，检测免疫血清抗体效价须用非口蹄疫疫苗免疫动物，无法从根本上取代本动物的使用，动物的选择仍存在困难。
2.疫苗抗原定量方法
FMDV在蔗糖密度梯度离心时根据沉降系数不同可以分为几种病毒粒子，分别是完整病毒(146S)、空衣壳(75S)、病毒感染相关成分(45S)和12S蛋白亚单位(12S)。146S抗原颗粒是口蹄疫疫苗中使动物机体产生保护性的主要免疫原成分，因此146S抗原颗粒的含量被视为与口蹄疫疫苗的效力具有平行关系。上世纪70年代，各种146S抗原颗粒定量的方法相继报道，如免疫扩散法，蔗糖密度梯度离心法，ELISA抗原定量法等，其中较常用的方法是蔗糖密度梯度离心法。1971年，Fayet等旧1首次建立了用紫外光定量蔗糖梯度中口蹄疫病毒粒子146S抗原颗粒的方法；1974年，Barreling等旧。在此基础上做了改进，使此方法更加精确敏感。DoelⅢo进一步发展和标准化了这个方法，并于1982年向OIE正式推荐了这个方法。1990年，Junsuke等哺。用蔗糖密度梯度离心法对口蹄疫灭活疫苗中的146S抗原颗粒纯化后，用软件CDS系统对146S抗原颗粒实现了电脑自动化定量。有研究者还开展了146S抗原颗粒含量与疫苗的本动物效力(PD∞)相关性的研究。试验证明，在一定的范围内，146S抗原颗粒的含量与疫苗效力有相关性。Rweyemamuml分析了口蹄疫灭活疫苗中抗原含量与免疫动物抗体水平的关系，确定了牛的抗体水平与疫苗146S抗原颗粒含量呈0.16log。
目前，猪场动力网感谢您的访问。体外抗原定量试验替代灭活疫苗的效力试验存在一些障碍：其一，大量的疫苗产品中含有佐剂等成分，抗原在进行测定之前必须与疫苗中的其他成分分开，并且要保证抗原的完整性;其二，免疫试剂对146S抗原颗粒定量测定存在一些干扰，比如用ELISA方法测定抗原含量时，ELISA中的单克隆抗体不能完全辨别抗原的所有功能区域，从而使抗原的量化不能完全反映抗原的免疫原性和本动物接种疫苗后一系列复杂的免疫反应。
3.总结和展望
口蹄疫灭活疫苗本动物效力检验替代方法的探索是国内现面临和亟待解决的一个问题，有效的替代方法应该具有很好的特异性、敏感性和重复性，而且要易于标准化。体外替代方法如血清学试验和抗原定量试验在生物安全、动物福利、效率和试验监测等方面具有优点。但这两种方法是对保护性的间接测定，仅能反映部分免疫反应的过程。如果抗体滴度或抗原含量与保护性不存在线性或其他曲线关系，或者保护性受细胞介导的免疫反应影响，血清学试验、抗原含量测定与保护性反应就不存在相关性，这样的体外替代方法很难完全替代本动物的效力检验。替代试验动物易于规模化饲养，均一性易控制。应用成本较低的动物进行试验可通过增加试验动物的数量而获得更加精确的试验数据。替代试验动物可以模拟疫苗免疫接种后抗原在体内通过网状内皮系统呈递的过程、细胞介导的免疫反应、疫苗佐剂产生的效应和靶组织的特异性等体外试验无法测定的过程。但替代试验动物模型只可能在某些方面与本动物的免疫反应和发病机理具有相似性，不可能完全复制本动物的真实情况。替代试验动物的健康状况、免疫剂量、攻毒方法等也会对试验的重复性和稳定性产生影响。伴随全世界减少或取消动物试验的需求，攻毒试验给发病动物带来的痛苦也违反了实验动物3R原则，就在科学研究中的应用。结合现阶段口蹄疫灭活疫苗效力检验替代方法的研究状况，我们认为在疫苗质量控制中，可以在生产阶段用抗原含量测定的方法保证疫苗中有效抗原的含量；而在成品疫苗的效力检验时尝试将体外检测方法与动物体内检测方法相结合进行综合评价，大批量的终产品检验可以通过体外试验数据来进行检验，从而减少试验的数量；在终产品的组分发生改变时用动物进行效力检验，以探索一种有较好重复性、可靠性和易于标准化的替代方法。
