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5 保温孵育
5.1 在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加酶结合物和加底物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育，保温过程按照说明书要求，一般为常温(20~25℃)温育，可根据室温适当调节保温时间。
5.2 在孵育期间，如果工作台温度过低，应适当铺垫纸巾或其他材料。
5.3 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后再添加样品，有利于检测结果的准确性。
6 洗板
6.1 ELISA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。
6.2 洗板时尤其是将孔内液体甩干时，动作要快、要干净利落，要把整板垂直倒置，将液体甩出，防止各孔液体混流，最后在吸水纸上拍干，不可甩干。此种方法可有效避免试剂盒孔的交叉污染。
6.3 洗板次数和两次洗板间隔时间应尽量按照说明书进行。
7 显色
7.1 显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。
7.2 在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。
7.3 定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。
8 测定
8.1 对定量判定应绘制半对数曲线，从曲线上读出样品对应浓度值。本实验室酶标仪通过吸光度可直接得出浓度值，再乘以相应稀释倍数即为样品中克伦特罗的实际浓度值。
8.2 对于每次实验浓度值的准确性判定可观察标准样品的吸光度值是否为线性关系，即吸光度值是否呈梯度递减。当吸光度值无明显梯度时应考虑重新检测。因为标准检测不准确，机器依照标准检出的数据也会不准确。
8.3 当板间差异性大时，可能原因是板与板之间孵育时间相差太大，板与板之间洗涤不一致，移液枪使用不当，温度不同等。
只要操作者严格按照步骤进行，并且每项操作都认真、仔细，尤其注重细节的操作，克伦特罗ELISA快速检测试剂盒的准确性也相对较高，较适合实验室大批样品的检测需要。
